Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Bursa Uludağ Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Tıp Bilimleri, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2025
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: OKTAY RODOPLU
Danışman: Cüneyt Özakın
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:
Amaç: Çoklu ilaca dirençli Gram-negatif bakterilerin giderek artması, tedavide yeniden kolistin kullanımını ve buna karşı gelişen direnç mekanizmalarını gündeme getirmiştir. Özellikle mcr-1 aracılı plazmid kaynaklı direnç, konjugasyonla bakteriler arasında hızla yayılabilmesi nedeniyle ayrı bir önem taşımaktadır. Çalışmanın amacı MCR-1179–541 proteinin rekombinant olarak üretilmesidir.
Gereç ve Yöntem: Escherichia coli NCTC 13846 suşundan amplifiye edilen mcr-1 geni, pET-41b(+) ekspresyon vektörünün XhoI ve NdeI restriksiyon bölgelerine entegre edildi. Rekombinant vektör E. coli BL21(DE3) hücrelerine transforme edildi ve IPTG ile indüklenerek ekspresyon sağlandı. Rekombinant protein, yapısındaki histidin etiketi sayesinde Ni-NTA HisTrap kolonu kullanılarak saflaştırıldı. Proteinin moleküler büyüklüğü ve çözünürlüğü SDS-PAGE yöntemiyle değerlendirildi. Western blot yöntemiyle rekombinant proteinin doğrulanmasında anti-HisTag antikoru kullanıldı.
Bulgular ve Sonuç: Çalışmada elde edilen deneysel bulgular, rekombinant MCR-1179–541 proteini için yapılan in silico analizlerle uyumlu bulundu. DNA jel elektroforezinde elde edilen bant profilleri, amplifikasyon ve restriksiyon aşamalarının başarılı biçimde tamamlandığını gösterdi. SDS-PAGE analizinde 42 kDa’da gözlenen bantlarının çözünmeyen kısımda bulunması, proteinin zarla ilişkili yapısını desteklemektedir. Saflaştırma sonrası hem kromatogram hem de spektrofotometrik ölçümle proteinin yoğun şekilde bulunduğu saptandı. Western blot analizi ise rekombinant proteinin ekspresyon ve saflaştırma sürecinin başarıyla gerçekleştiğini ortaya koydu. Bu protein plazmid kaynaklı kolistin direncinin yapısal, fonksiyonel ve tanısal düzeyde araştırılmasında kullanılabilecek güvenilir bir model olarak değerlendirilebilir.
Anahtar Kelimeler: Kolistin direnci, mcr-1, rekombinant protein