Kanser hücre modeli olarak uyarılmış kanser kök hücre benzeri hücrelerin oluşturulması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Bursa Uludağ Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Moleküler Biyoloji ve Genetik, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2017

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SEVİL GONCA

Danışman: Sezai Türkel

Özet:

Yamanaka ve arkadaşları 2006 yılında somatik hücreleri yeniden programlayarak pluripotensi özellikleri indüklemeyi başarmışlardır. Yeniden programlama için dört köklülük faktörü (Oct3/4, SOX2, KLF4, c-MYC) belirlenmiştir. Bu çalışmada, Yamanaka ve arkadaşları tarafından belirlenmiş 4 köklülük faktörünü içeren plazmidin, kronik miyeloid lösemi hücre hatları K562 ve KU812'ye transfeksiyonu ile kanser hücre modeli olarak uyarılmış kanser kök hücre benzeri hücrelerin oluşturulması amaçlanmıştır. Transfeksiyon sonrası köklülük faktörleri SOX2 ve OCT4 gen ifadeleri RT-PCR ile değerlendirilmiştir. Plazmid transfeksiyonunun onuncu gününde, KU812 hücre hattı SOX2 gen ifadesinde 7230 kat, OCT4 gen ifadesinde 1320 kat artış gözlendi. K562 hücre hattı için SOX2 gen ifadesinde 92,4 kat, OCT4 gen ifadesinde 1,1 kat artış gözlendi. Belirli markörlerin protein düzeyleri akış sitometrisi ve immün floresan boyama ile test edildi. Bu testlerin sonuçları CD31, CD44 ve CD105 protein ekspresyon düzeylerinin hem transfekte edilmiş K562 hem de KU812 hücre hatlarında yüksek oranda arttığını gösterdi. K562 hücre hattının nöronal farklılaşması, immünofloresan boyama ile Neurofilament antikor kullanılarak gösterildi. Tanımlanmış dört faktörün transfeksiyonundan sonra, KU812 hücreleri, plazmid verilmemiş KU812 hücre hattına kıyasla yaklaşık 4 misli yüksek telomeraz aktivitesi gösterdi. K562 hücrelerinin nöronal farklılaşmasından sonra, telomeraz aktivitesi plazmid verilmemiş K562 hücrelerinden yaklaşık 15 kat daha düşük olduğu tespit edildi.