[S057] NTCP Transfeksiyonuna Dayalı In Vitro HBV Enfeksiyon Modelinin Geliştirilmesi ve Hücresel Etkilerinin İncelenmesi

Creative Commons License

Sağlık İ., Aksoy F., Aslan G., Aksoy S.

8. Ulusal Klinik Mikrobiyoloji Kongresi, Antalya, Türkiye, 19 Kasım 2025, (Özet Bildiri)

  • Yayın Türü: Bildiri / Özet Bildiri
  • Basıldığı Şehir: Antalya
  • Basıldığı Ülke: Türkiye
  • Bursa Uludağ Üniversitesi Adresli: Evet

Özet

NTCP Transfeksiyonuna Dayalı In Vitro HBV Enfeksiyon Modelinin Geliştirilmesi ve

Hücresel Etkilerinin İncelenmesi

İmran Sağlık¹, Fuat Aksoy², Gözde Arslan³, Seçil Ak Aksoy1

 

¹ Bursa Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Bursa, Türkiye

² Bursa Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi, Genel Cerrahi Anabilim Dalı, Bursa, Türkiye

³ Bursa Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi, İmmünoloji Bilim Dalı, Bursa, Türkiye

 

Giriş ve Amaç

 

Hepatit B virüsü (HBV), Hepatoselüler Karsinomun (HCC) en önemli etkenlerinden biridir. Özellikle siroz zemininde gelişen HBV-ilişkili HCC olgularında ortotopik karaciğer nakli (Orthotopic Liver Transplantation, OLT) lokal veya sınırlı HCC için küratif bir seçenektir; ancak nakil sonrası nüks gelişmesi ciddi bir sorundur. Kurumumuzda yapılan önceki çalışmalarda, HBV-ilişkili HCC olgularında OLT sonrası nüks gelişen hastalarda miR‑21, MALAT1, PVT1 ve SNHG16 gibi uzun kodlamayan RNA’ların (lncRNA) ekspresyon düzeylerinde değişiklikler olduğu gösterilmiştir.

Daha önce, NTCP (sodyum-taurokolat kotransporter proteini) aracılı HBV enfeksiyon modelleri tanımlanmış olmasına rağmen, bu çalışmada hastalarda bulunabilecek diğer etkenlerden bağımsız olarak geliştirilmiş bir in vitro HBV enfeksiyon modelinde, HBV enfeksiyonunun hücresel proliferasyon, migrasyon ve onkojenik lncRNA ekspresyonu üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.

 

Gereç ve Yöntem

 

HepG2 hücreleri pDONR221_SLC10A1 plazmidi (Addgene, ABD) kullanılarak Lipofectamine™ 6000 (Thermo Fisher Scientific, ABD) ile transfekte edilmiştir. NTCP ekspresyonu doğrulandıktan sonra hücreler HBV DNA pozitif hasta serumları (10⁶–10⁷ IU/mL) ile %5 PEG8000 ve %2 DMSO içeren inokulumla enfekte edilmiştir. HBV DNA, HBsAg ve HBeAg düzeyleri 3., 5. ve 7. günlerde ölçülerek enfeksiyon doğrulanmıştır.

Tümör agresifliği hücre düzeyinde koloni formasyon testi ve yara iyileşme (scratch) deneyi ile değerlendirilmiştir. Koloni sayısı ve çapı ImageJ yazılımı ile; yara kapanma oranı ise (1 – [kalan alan / başlangıç alanı]) × 100 formülüyle hesaplanmıştır. Ayrıca, miR-21, MALAT1, HULC, PVT1 ve SNHG16 ekspresyonları qPCR yöntemiyle analiz edilmiştir.

 

Bulgular

 

Enfekte NTCP-HepG2 hücrelerinde HBV DNA, HBsAg ve HBeAg pozitifliği saptanmıştır. Koloni oluşumu ve migrasyon hızında anlamlı artış izlenmiş (p < 0.001); çizik alanı 16. saatte %64.6 ± 9.8 oranında kapanmıştır. Moleküler analizlerde, MALAT1 (5.37’ye 1.87; p = 0.004), HULC (4.7’ye 2.3; p = 0.010) ve PVT1 (2.17’ye 1.17; p = 0.013) ekspresyonlarında anlamlı artış gözlenmiştir. Buna karşılık miR-21 ve SNHG16’da istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmamıştır.

Bu RNA’ların her birinin HCC olgularında kötü prognoz ve yüksek tümör derecesi ile ilişkili olduğu gösterilmiştir; ancak HBV-ilişkili HCC’de nüks ile ilişkili ekspresyon paternleri literatürde sınırlı biçimde araştırılmıştır.

 

Sonuç

 

Bu çalışma, NTCP-transfekte HepG2 modelinin yalnızca HBV enfeksiyonu oluşturmakla kalmayıp, HCC’ye özgü onkojenik RNA yanıtlarını da yansıttığını göstermektedir. HBV enfeksiyonu hücrelerde proliferasyon ve migrasyonu artırmış, onkojenik lncRNA ekspresyonlarını anlamlı biçimde değiştirmiştir. Modelimiz, HBV’ye bağlı HCC’de prognostik biyobelirteçlerin fonksiyonel olarak doğrulanmasına olanak sağlayan özgün bir ortam sunmaktadır. Çalışmamızda antiviral ajan uygulanmamıştır; ancak planlanan ileri aşama çalışmalar, antiviral ajanların ardından lncRNA düzeylerinde değişikliğin fonksiyonel doğrulanmasını hedeflemektedir.

 

Bu çalışma, TÜBİTAK (Proje No: 324S308) tarafından desteklenmiştir.

 

Anahtar Kelimeler: Hepatit B virüsü, in vitro model, NTCP, migrasyon, proliferasyon, lncRNA

 

 

1.  Aksoy F, Kaya E, Aksoy Ak S, Dündar HZ, Tunca B. Long non-coding RNA HULC overexpression predicts tumor recurrence of hepatocellular carcinoma after liver transplantation. Transpl Int 2021;34:302.

2.  Dündar HZ, Aksoy F, Aksoy SA, Taşar P, Uğraş N, Tunca B, et al. Overexpression of miR-21 is associated with recurrence in patients with hepatitis B virus-mediated hepatocellular carcinoma undergoing liver transplantation. Transplant Proc 2019;51(4):1157-61.

3. Hu J, Lin YY, Chen PJ, Watashi K, Wakita T. Cell and animal models for studying hepatitis B virus infection and drug development. Gastroenterology 2019;156(2):338-54.

4. Song Y, Shou S, Guo H, Gao Z, Liu N, Yang Y, et al. Establishment and characterization of a new cell culture system for hepatitis B virus replication and infection. J Virol 2021;95(16):e00569-21.

5. Samudh N, Shrilall C, Arbuthnot P, Bloom K, Ely A. Diversity of Dysregulated Long Non-Coding RNAs in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Front Immunol;13:834650. doi: 10.3389/fimmu.2022.834650.