Research Information System
26. ULUSAL İMMÜNOLOJİ KONGRESİ, Ankara, Turkey, 11 - 13 November 2023, pp.86
Giriş: Makrofajlar kemik iliği, yolk sac kesesi ve fetal karaciğerden kökenlenir. Doku yerleşik makrofajlar, kemik iliği
türevlerine göre daha plastisiteye sahiptir. Doku yerleşik makrofajlar heterojendir; doku işlevi ve homeostazisinin ayrılmaz
parçası olan gelişim ve yetişkinlik sırasında dokuya özgü ve mikroanatomik nişe özgü işlevler için gereklidir. Bu hücrelerin
izolasyonu ve karakterizasyonu kısıtlıdır. Çalışmamızda doku yerleşik makrofajların izolasyonu ve kültür ortamında çoğaltıldı.
Materyal-Method: BALB/c farelerden akciğer, beyin ve karaciğer çıkartıldı. Dokular DMEM/F12 içerisine bütün/parçalanmış
halde yerleştirildi. Kemik iliğinden türetilmiş hücreler, L929 hücre hattının süpernatanı ile kültürlendiler. Kültür 10 gün
inkübasyona bırakıldı, ortam her 4 günde yenilendi. Sferoidler ayrılırken, dokuya sızan/yerleşik makrofajlar dispaz/kollajenaz
kullanılarak ayrıldı. Dokular gece boyunca dispaz ile +4oCde bekletildikten sonra ertesi gün kollajenaz eklendi ve 37oCde 2
saat inkübe edildi. Dokular ve sferoidlerden izole edilen hücreler, 1.077 g/ml ve 1.119 g/ml Ficoll üzerine yayıldı. Hücreler
akış sitometrisi ile değerlendirildi.
Sonuç-Tartışma: Çalışmamızda doku yerleşik makrofajların varlığını göstermek için F4/80 antikoru kullanıldı. Beyin ve
karaciğer için CD45+ hücrelerden CD11b+ popülasyonu, akciğer için CD45+ hücrelerde CD11c+ popülasyonu seçildi,
hücrelerde F480 pozitifliği görüldü. Kemik iliği+L929 süpernatanı ile inkübe edilmiş beyin hücrelerinin CD11b ekspresyonunu
desteklediği görüldü. Akciğer ve karaciğer hücrelerinde CD11b ekspresyonunda farklılık gözlemlenmedi. CD11b popülasyonu
içerisinden F4/80 analizlerinde beyin ve akciğer hücrelerinde kemik iliği+L929 süpernatanı ile inkübe edilmiş hücrelerde F4/80
ekspresyonunun desteklendiği görüldü. Karaciğer hücrelerinde kemik iliği+L929 süpernatanı ile inkübe edilmemiş hücrelerde
F4/80 ekspresyonunda artma gözlemlendi. Çalışmamızda doku yerleşik makrofajların popülasyonu az olduğu ve
saflaştırıldıklarında organ nişlerinden bağımsız çoğalma gösterdikleri için popülasyonu arttırmak adına mikroçevreyi
koruyarak protokol dizayn ettik. Sonuç olarak izole edilen doku yerleşik makrofajların yüzdesi %5-%10 arasında olduğundan
anlamlı farklılık görebilmek adına deneyler tekrarlanmalı ve veriler genişletilmelidir.
Destekleyen Kuruluş (Kurum, proje numarası vb.): Bursa Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri (BAP) Alt-yapı
projesi (AYP), Proje no: TAY-2022-601